ПЦР-тест с использованием полимеразной цепной реакции представляет собой молекулярный метод, используемый в первую очередь для диагностики инфекций. Тест также проводится для выявления болезни Лайма (клещевого заболевания). Благодаря возможности дупликации интересующего нас фрагмента ДНК можно обнаружить генетический материал микроорганизмов. Что такое метод ПЦР и как проводится тест, узнайте на analizcentr.ru.
ПЦР-тест – что это
Метод ПЦР является одним из наиболее часто используемых молекулярных методов, который все чаще применяется в диагностике инфекций различной этиологии.
Суть ПЦР-теста заключается в обнаружении определенного фрагмента ДНК в тестируемом материале. Чтобы обнаружить ДНК или РНК в образце, его необходимо амплифицировать в несколько копий. Это обеспечивает высокую чувствительность метода и возможность обнаружить интересующий фрагмент ДНК даже при наличии его в материале в следовых количествах.
Для того чтобы ПЦР-реакция прошла, необходимо приготовить реакционную смесь, состоящую из:
- тестируемый образец, в котором мы ищем генетический материал;
- праймеры, т.е. специально сконструированные фрагменты ДНК, комплементарные искомому фрагменту ДНК;
- нуклеотиды, необходимые для синтеза амплифицированной ДНК;
- ДНК-полимераза, т.е. фермент, катализирующий ход реакции;
- буфер.
Смесь следует поместить в специальный аппарат, так называемый термоциклер, обеспечивающий соответствующие условия реакции. На отдельных стадиях реакции необходимо поддерживать оптимальную температуру, обеспечивающую амплификацию искомого фрагмента ДНК – до тех пор, пока он присутствует в образце.
ПЦР-тест можно модифицировать разными способами; Например, часто используется реакция ПЦР в реальном времени, которая позволяет отслеживать процесс размножения ДНК в реальном времени — все благодаря явлению флуоресценции. При использовании этого метода нет необходимости визуализировать дублированный фрагмент ДНК после завершения реакции, например, с помощью окрашивающих маркеров.
Кто открыл ПЦР тестирование
Этот вид диагностики коронавируса признан лучшим из-за надежности. Она составляет 99%. Такой тест не только помогает обнаружить носителя инфекции, но и вовремя выявить контактирующих.
В 1993 году автор методики полимеразной цепной реакции, Кэри Мюлис, получил Нобелевскую премию по химии. Ее суть в том, что берется фрагмент ДНК в малой концентрации и значительно искусственно увеличивается при помощи ферментов.
PCR считается самым чувствительным, потому что определяет наличие возбудителя и его количество, даже когда содержание минимальное. Анализ этим методом особенно актуальный при бессимптомном течении заболевания.
Какие инфекции выявляет ПЦР-тест
Метод ПЦР все чаще используется для быстрой диагностики вирусных, бактериальных или паразитарных инфекций. Использование традиционных методов диагностики инфекций, т. е. посевов или культур клеток, является трудоемким методом – результат получается через несколько дней.
С другой стороны, широко используемые серологические методы, такие как метод ИФА, не всегда достаточно точны и могут вызывать, например, перекрестные реакции. Напротив, метод ПЦР очень быстрый, точный и чувствительный.
Это обследование позволяет диагностировать:
- бактериальные инфекции (в основном Borrelia burgdorferi — возбудитель болезни Лайма, кишечная палочка , золотистый стафилококк , туберкулез); метод ПЦР имеет особое значение при инфекциях крови, когда необходимо как можно быстрее поставить диагноз;
- вирусные инфекции (ВИЧ, коронавирус, герпес, вирус Эпштейна-Барра, вирусы гепатита, цитомегаловирус, опоясывающий лишай).
Благодаря методу ПЦР также можно обнаружить паразитарные инфекции (Chlamydia trachomatis).
Метод ПЦР тестирования: материал для исследования
ПЦР-тестирование можно проводить на многих биологических материалах, взятых у пациента. Одним из самых популярных является анализ крови – пациенту не нужно голодать или готовиться к сдаче анализа.
Другой материал — мазки, взятые из шейки матки, уретры, горла и носа. В таких случаях необходимо соблюдать правила сбора материала. Мочу следует сливать утром в стерильную емкость, предварительно промыв область половых органов водой с мылом.
В случае сбора мазков из шейки матки следует избегать применения вагинальных средств, а при сборе мазков из уретры желательно воздержаться от мочеиспускания за час до сбора материала.
Не чистите зубы перед взятием мазка из зева. Другие материалы для ПЦР-тестирования включают: образцы кожи, синовиальную и спинномозговую жидкость.
Советуем почитать: Что такое LYM в анализе крови
Метод ПЦР тестирования на коронавирус
Такой вирус, как SARS-CoV-2, проходит через рот, глаза, нос и таким образом достигает человеческого организма. С помощью специфичных шипов он цепляется клеток и фиксируется на мембранах. Чаще всего поражаются данным вирусом ткани систем пищеварения, мочевыделения, дыхания, ЦНС, также страдает сердце.
Как только человек заразился вирусом SARS-CoV-2, на протяжении первых нескольких дней он размножается непосредственно в эпителии носоглотки, причем делает это активно. Инфекция находиться в слюне, секрете, которое отделяется. Распространение инфекции между окружающими происходит во время глубокого дыхания, кашля, чихания больного человека. Последний может и сам не подозревать о болезни.
Даже при отсутствии симптомов человек будет опасным и заразным. В большинстве случаев коронавирус напоминает стандартное ОРВИ, который не обладает какими-то особыми проявлениями. Чтобы определить, попал ли новый патоген в организм, стоит сделать ПЦР-тест.
Коронавирусы не циркулируют в лимфе, крови. Поэтому и анализ делают с носоглотки, ее слизистых оболочек. Медики утверждают, что у пациентов, у которых диагностируют манифестное либо бессимптомное течение болезни, есть вероятность, что результаты теста будут ложными. Возбудитель не будет долго оставаться на эпителии. Поэтому рекомендуется проводить анализ несколько раз. Если у человека долгое время не могут выявить коронавирус, можно сдать другой анализ – на антитела. Для этого используют метод ИФА.
Важно подготовиться к тому, когда будут брать биоматериал для исследований. Иначе возрастает риск получить ложный результат. За сутки до анализа нельзя употреблять алкоголь и принимать антимикробные препараты.
Непосредственно перед самим анализом (за 2 часа) нельзя курить, чистить зубы, кушать леденцы, освежающие дыхание, пить воду, напитки, употреблять пищу. Также специалисты не рекомендуют пользоваться ингаляторами, назальными препаратами, полоскать рот или жевать жвачку.
Мазок берут из зева человека. При желании весь набор для диагностики курьер может доставить на дом больному, при этом все выполняется бесконтактно. Аппликатором, который расположен на конце стерильного тампона, проводят по слизистой. После материал кладут в герметичный пакет, после чего отправляют на исследование в лабораторию.
Возбудитель коронавируса относится к РНК-вирусам. Геном, который обнаруживают у человека, во время тестирования переводят в ДНК. А позже он обратно превращается в РНК.
Если говорить о полном цикле анализа, то результаты можно получить спустя 2-4 дня. Существует экспресс-диагностика, с результатами которой можно ознакомиться уже через 1 час. Однако такой тест будет иметь большую погрешность. Подобные данные считают предварительными, которые обязательно нужно повторно проверить.
ПЦР-тест и генетические заболевания на рак
ПЦР-тест также используется в онкологической диагностике, где он позволяет не только диагностировать рак, но и контролировать многие онкологические заболевания: лейкоз, рак легких, колоректальный рак, рак молочной железы.
Все большее значение приобретают и профилактические тесты на рак – ПЦР-тест позволяет оценить предрасположенность к определенным видам рака. Например, мутации в генах BRCA1 и BRCA2 повышают риск развития рака молочной железы, а мутации в генах APC и CHEK2 в сторону предрасположенности к раку шейки матки.
ПЦР — это анализ крови, который можно использовать для диагностики некоторых генетических заболеваний, а также для установления отцовства. Также возможно использование метода ПЦР в токсикологии.
ПЦР-тест и болезнь Лайма
Одним из все более распространенных применений ПЦР является диагностика болезни Лайма (клещевого заболевания). Болезнь Лайма становится все более распространенным заболеванием, но ее диагностика по-прежнему остается проблематичной. Оказывается, обычно используемые серологические методы имеют значительные ограничения.
На ранних стадиях заражения наблюдается серологическое окно – антитела против Borrelia burgdorferi обнаружить невозможно, поскольку организм их еще не синтезирует. Кроме того, люди с ослабленным иммунитетом не будут синтезировать достаточное количество антител. Метод ПЦР отлично подойдет в каждой из этих ситуаций.
ПЦР и клещевой тест
Анализы на болезнь Лайма генетическим методом можно проводить с момента заражения. Интересно, что можно осмотреть клеща, снятого с места укуса. ПЦР-тест на болезнь Лайма также идеален для тех людей, у которых наблюдаются симптомы инфекции Лайма, а серологические тесты дают отрицательный результат.
Таким образом, ПЦР является очень точным и быстрым методом. Однако важно помнить о правильном сборе материала для исследования. Помимо клещевого исследования, это могут быть образцы кожи с места укуса или места мигрирующей эритемы, а также синовиальная жидкость, спинномозговая жидкость, кровь или моча.
Советуем почитать: Что такое МНО в анализе крови
